Un ensemble de trois chambres d'écluses, sur une seule voie, permettant en trois ascensions de 8-9 m d'atteindre le niveau du lac Gatún, situé à 26 m au-dessus du niveau de la mer. Elles mesurent 427 m de long, pour 55 de large, et ont une profondeur de 18 m. Elles comportent trois bassins latéraux visant à récupérer une partie de l'eau d'éclusage, qui peut ainsi être réutilisée aux deux-tiers lors de l'éclusage suivant. Elles sont fermées par 16 portes métalliques coulissantes, de 57,6 m de long pour 10,8 de large, et d'une hauteur variant de 22 à 33 m, en fonction de leur emplacement et de leur poids (entre 2 100 et 4 200 tonnes).